蛋白结晶机器人ORYX的简单介绍

蛋白结晶机器人ORYX的详细信息

完整的膜蛋白如G蛋白偶联受体（GPCR）和离子通道，是参与细胞信号通路、细胞稳态和人类疾病的关键分子；大约三分之一已批准的药物靶定了这些蛋白。因此，获得膜蛋白的高分辨率结构信息，以便与分子和细胞数据互补，对科学界和药物开发行业相当重要。

众所周知，膜蛋白很难纯化和结晶，因为它们在天然脂双层之外的环境中不稳定，容易沉淀。正因为如此，使用水溶液的结晶学传统方法不适合它们的重新溶解。在1996年，科研人员开发出一种in meso脂立方相（LCP）技术，实现了细菌视紫红质的结晶¹，从那以后也彻底改变了膜蛋白的结晶过程。这种方法为膜蛋白的成核和生长提供了一个框架，从而促进了结晶。

LCP结晶是通过两个步骤开展的。首先，蛋白与脂类混合，自发形成脂立方相，产生了果冻状的高粘稠物质。为了加强结晶，还添加了添加剂和沉淀物，取决于不同条件，结晶一般在数日或数周出现。

结晶试验通常包括在样品上试验的大量条件。高效的结晶试验不仅需要尽可能降低样品体积，以确保宝贵蛋白的最大限度利用，还需要自动化开展，以便减少艰苦的体力劳动并加速平板制备过程。自动化减少了手动移液的误差，并确保了样品均一性。

目前与LCP方法相关的多个技术问题为此过程的自动化带来了挑战。然而，主要问题在于很难准确处理小体积且极为粘稠的立方相材料，直到最近，这一问题才成功解决。

脂类/蛋白相的混合和处理

蛋白和脂类的混合问题是由Martin Caffrey成功解决的，这位科学家目前在都柏林的圣三一学院，他开发出一种方法来连接两个注射器，一个含有脂类，而另一个含有蛋白，这两个注射器由体积连接器相连。注射器之间蛋白和脂类的来回反复混合使得脂立方中间相形成2。

英国Douglas 公司的Ory4/Oryx8® LCP移液设备旨在将LCP材料和筛选缓冲液的纳升级分液过程自动化。

Ory4/Oryx8® LCP融合了已被广泛接受的Ory® Crystal的特征和功能，将Ory移液头与微注射器分液器相结合，能将10-2000 nl的LCP材料准确分配至载玻片或市售的平板上。Ory® LCP与所有SBS形式的平板兼容.
Ory4/Oryx8® LCP分配体积的分析证明了它的高准确性，对于低至5nl的体积，误差小于1%。

Ory-LCP的特点是集多种加样方法于一身，专门为蛋白质结晶设计的LCP专用加样头，可以克服任何粘性溶液的不同流动性，无论是纯水或是100%甘油，均可准确的将最小分配体积5nL的蛋白样品溶液快速分配到实验板上，误差均小于2%的CV值，而且接触式点样的速度也快于目前其他同类型产品，在五分钟内可以完成一个96孔板。

自动LCP混液功能，可以将获取的蛋白溶液和LCP实验专用酯类同时混合在一个进样器中，极大方便了LCP实验的需要

英国Doulas 公司中国代表处